TERAPIA EPIGENÓMICA

Tema	Reexpresión epigenética de la hemoglobina F mediante inhibidores reversibles de LSD1: terapias potenciales para la anemia de células falciformes
Mecanismo epigenómico	LSD1 (demetilasa 1 específica de lisina de amino oxidasa dependiente de flavina) elimina grupos metilo de la marca de cromatina activante histona 3 lisina 4.
Cómo se hizo	Quimica: destilación de trietilamina a partir de hidróxido de potasio. Preparación de metanol seco, acetato de etilo, tetrahidrofurano, dimetilformamida y hexano usando un sistema de purificación de disolvente de contorno de vidrio. Ensayo enzimático: evaluación de la capacidad de los compuestos para inhibir LSD1 / CoREST recombinante. Cultivo de células: células K562 (leucemia mielógena humana) se adquirieron de ATCC, se cultivaron en medio de Dulbecco modificado de Iscove que contenía suero bovino fetal al 10%. RT-Qpcr
Resultados	·     Estos compuestos son eficaces para promover la reexpresión de γ-globina y, por lo tanto, HbF, presumiblemente al interrumpir el complejo DRED y permitir la reexpresión del gen de γ-globina. ·     Aunque se requieren estudios de toxicología más extensos, nuestros resultados preliminares sugieren que nuestros inhibidores serán mejor tolerados que los inhibidores de LSD1 basados ​​en tranilcipromina informados anteriormente que no han tenido éxito en la clínica para el tratamiento de la ECF.

referencia bibliogáfica
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7315572/

Corrección de la mutación falciforme mediada por CRISPR / Cas9 en células CD34 + humanas

TIPO DE EDICIÓN	Ex vivo
DIRIGIDO HACIA	Células madre hematopoyéticas humanas, células CD4, Gen HBB
DIRIGIDO POR	Proteínas tipo enzimas ·      nucleasas de dedos de zinc (ZFN) ·      nucleasas efectoras de tipo activador de la transcripción (TALEN) RNA y enzimas combinadas ·     CRISPR/Cas9 Grna ·   ARN cr ·   ARNcr trans-activador auxiliar
ÓRGANO A TRATAR	Médula ósea
VÍA DE ADMINISTRACIÓN	Trasplante de Médula ósea
RESULTADOS	las tasas de inserciones y deleciones en el sitio de destino se cuantificaron mediante secuenciación de alto rendimiento y se promediaron en estos resultados demostraron la capacidad de apuntar y modificar con éxito las células CD34 + mediante la administración transitoria de reactivos CRISPR / Cas9 y una plantilla de donante homóloga.  Al final de la diferenciación de eritroides, las muestras se evaluaron mediante cromatografía líquida de alta resolución en busca de tetrámeros de globina. Las células SCD BM CD34 + tratadas con ARNm Cas9 e IDLV mostraron producción de hemoglobina A (HbA) adulta de tipo salvaje. Estos resultados demuestran la capacidad de los reactivos de edición del genoma administrados de forma transitoria para conducir a altas tasas de corrección de la mutación de células falciformes en las células SCD BM CD34 + y la posterior producción de HbA

REFERENCIA BIBLIOGÁFICA

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5113113/

 

TIPO DE STEM CELLS	·      células madre pluripotentes inducidas  (iPSC) a partir de pacientes con β-thal y SCD que tienen mutaciones únicas de HBB
MÉTODO DE OBTENCIÓN	·       Obtención de células mononucleares de sangre periférica (CMN) de dos pacientes mayores β-thal dependientes de transfusiones. ·      Cultivo de MNC ·      Reprogramación mediante la expresión transitoria de vectores ·       se realiza tinción fluorescente viva del marcador de pluripotencia TRA ‐ 1‐60 en las colonias emergentes de iPSC. ·      Cultivo de líneas establecidas de β-thal iPSC en el medio Essential 8. ·      Diferenciación de las iPSC se realizó a través de cuerpos embrioides (EB. ·      Secuenciación de genoma ·      CRISPR/Cas 9 ·      Inmunocitoquímica ·      PCR ·      Análisis cito métrico de flujo ·      Western blot
VIA DE ADMINISTRACIÓN	Trasplante de médula ósea
RESULTADOS A CORTO,MEDIANO Y LARGO PLAZO	·      En la primera estrategia, necesitaremos generar HSPC trasplantables a partir de iPSC corregidas genéticamente, que sean capaces de generar eritrocitos en la médula a largo plazo y producir proteínas HBB funcionales en los eritrocitos circulantes. ·      La segunda estrategia es producir eritrocitos ex vivo a partir de iPSC humanas autólogas, y luego infundir a pacientes que dependen de transfusiones.

Referencias Bibliográficas

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5746148/

 

La recombinación genética es una fuente fundamental de variabilidad genética debido al intercambio de material genético que se presenta entre ambos fragmentos que pueden dar lugar a una información genética nueva y válida. Muchos procesos naturales transfieren DNA de un organismo o incluso de una especie a otro.

El DNA se recombina de manera natural en el proceso de la reproducción sexual:                     El entrecruzamiento durante la meiosis I intercambia DNA de cada cromosoma materno con el DNA homólogo del cromosoma paterno. Después de la recombinación, los cromosomas contienen nuevas combinaciones de alelos, diferentes de las de ambos progenitores, por lo que se considera todo ovulo y espermatozoide producido por meiosis como "recombinante".

El ADN recombinante, o ADN recombinado es una molécula de ADN artificial formada de manera deliberada in vitro por la unión de secuencias de ADN proveniente de dos organismos de especies diferentes que normalmente no se encuentran juntos.

Esta técnica se puede utilizar en la Anemia de células Falciformes mediante la edición de genes después de la escisión de la nucleasa del diseñador en presencia de una plantilla de donante de ADN y así revertir las mutaciones en el gene que causa la enfermedad.

Para obtener un beneficio óptimo, la reversión de la mutación puntual en HBB que conduce a la enfermedad de células falciformes (SCD) permitiría una reparación dirigida por homología precisa (HDR) y al mismo tiempo limitaría al mismo tiempo la disrupción de HBB basada en la unión de extremos no homólogos.

En este estudio se compara la eficacia relativa de la co-entrega de una nueva ribonucleoproteína CRISPR / Cas9 dirigida a HBB en asociación con el virus adenoasociado recombinante 6 (rAAV6) versus oligodesoxinucleótidos monocatenarios (ssODN) para introducir la mutación falciforme o un cambio silencioso.

 

Enviropig

También conocido como Frankenswine, es un tipo de cerdo que se ha modificado genéticamente: contiene ADN de ratón y de E. Coli. Ello le permite procesar y digerir mejor el fósforo y se ha creado con la idea de no solo no tener que darle fósforo adicional, sino que sus excrementos sirvan como abono sin que el exceso de este elemento acabe en los mares y ríos y afecte negativamente al medio ambiente y a otros animales.

Referencias Bibliográficas

1.- https://books.google.com.ec/books?id=uO48-6v7GcoC&pg=PA244&lpg=PA244&dq=formas+de+recombinacion+del+adn+en+la+naturaleza&source=bl&ots=vWoBIM0OVx&sig=fuDRzKCAANhpVj8sE_3M4kedmOo&hl=es&sa=X&ei=w-N0VZHxLoeqNp2lgbgC&redir_esc=y#v=onepage&q=formas%20de%20recombinacion%20del%20adn%20en%20la%20naturaleza&f=false

2.- https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6611979/

3.- https://www.ecoticias.com/naturaleza/128614/Animales-transgenicos-quiza-conocias