Diagnóstico Prenatal para Anemia Falciforme
(PCR-ARMS)
Se utiliza muestras de líquido amniótico de parejas en riesgo de anemia falciforme para la detección de los alelos βS. Se realiza extracción de ADN, mediante el método de precipitación salina con 20mL de líquido amniótico recolectado en un tubo estéril. Para detectar la presencia de los alelos βS se utiliza el método de Reacción en Cadena de la Polimerasa-Amplificación Refractaria de Mutaciones Específicas (PCR-ARMS),utilizando un juego de cebadores como control interno de amplificación y un cebador común para amplificar los alelos A, S y C. La amplificación se realizó en un termociclador e incluye un varios ciclos de desnaturalización y una extensión final. Para realizar la corrida electroforética se mezcla 25 μL del producto de PCR obtenido con 5 μL de bromofenol azul (BFA) como frente de corrida que fueron aplicados en un gel de agarosa al 2 %, teñido con bromuro de tidio y finalmente, los fragmentos se visualizan al exponer a luz ultravioleta el gel de agarosa teñido con bromuro de tidio.
Prueba de diagnóstico
Electroforesis de hemoglobina con pH alcalino
La electroforesis a pH alcalino permite determinar el tipo de hemoglobina predominante. en el caso de Anemia Falciforme con genotipo homocigoto la única banda electroforética presente o de mayor intensidad corresponde a la hemoglobina S (HbS), con ausencia total o escasa presencia de HbA normal. En el estado heterocigoto las bandas electroforéticas de las hemoglobinas A y HbS suelen tener la misma intensidad.
Referencias Bibliográficas
