sábado, 18 de julio de 2020

APLICACIÓN DE PCR PARA ESTUDIO DEL GEN BETA-GLOBINA EN LA ANEMIA DE CÉLULAS FALCIFORMES


Prueba PCR para diagnóstico de Anemia de Células Falciformes
Tema (T):
PCR para diagnóstico de Anemia de Células Falciformes
Objetivo (O):
El objetivo es estudiar las secuencias de nucleótidos y el estudio molecular del gen de la β-globina en pacientes saudíes con anemia falciforme, e identificar las variantes genéticas asociadas con las manifestaciones clínicas.
Tipo de Muestra Biológica (M):
Se extrajeron diez ml de sangre venosa y se distribuyeron a dos tubos (cada uno con 5 ml) de ácido etilendiamina tetraacético (EDTA). 
Secuencia o Gen a amplificar (G):

Tipo de Ácido Nucleíco a ser extraído (AN):
  El ADN genómico de los pacientes.
Extracción (Ex)
 El ADN se extrajo usando un kit de purificación de gel Qiagen, de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Tipo de PCR (PCR):
Se usa RT-PCR, se uso cebadores de PCR. Treinta y cinco ciclos de PCR
Visualiación (V):
El gel amplificado se visualizó y fotografió bajo luz UV (Bio-Rad Gel Doc 2000 Imaging System).

Refencias Bibliográficas


sábado, 11 de julio de 2020

EPIGENÉTICA EN ANEMIA FALCIFORME

Revista de ciencias
Los trastornos del gen de la βglobina, como la enfermedad de células falciformes (SCD) es el resultado de mutaciones genéticas en el gen de la β-globina, y fue uno de los primeros trastornos abordados con terapia específica epigenética. Las estrategias para la terapia epigenética se centraron en la reactivación de la expresión fetal de γ-globinaa. 
El curso clínico de las β-hemoglobinopatías se ve mejorado por los niveles elevados de γ-globina fetal, que reduce el desequilibrio de la cadena de globina en las β-talasemias y ejerce un potente efecto antisickling en SCD. Las deleciones grandes que ocurren naturalmente que abarcan los genes de globina β producen un aumento congénito de la expresión de hemoglobina fetal (HbF) conocida como persistencia hereditaria de HbF (HPFH), que mejora los fenotipos SCD. Se cree que las grandes deleciones de HPFH eliminan las secuencias inhibidoras de HbF o yuxtaponen los promotores de γ-globina a regiones potenciadoras remotas. Varios estudios demostraron que BCL11A, un represor transcripcional, es necesario para mantener el silenciamiento de la expresión de HbF. BCL11A interactúa con GATA1, FOG1, SOX6 y el complejo represor NuRD y ocupa sitios críticos dentro del grupo de genes de β-globina, incluidas secuencias específicamente eliminadas en individuos HPFH. Estas observaciones proporcionan una fuerte justificación para desarrollar la terapia génica y la edición del genoma enfoques para el tratamiento de las β-hemoglobinopatías destinadas a inducir una conmutación inversa de la globina β a γ.
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Referencias bibliográficas

sábado, 4 de julio de 2020

ALTERACIONES POS TRADUCCIONAL EN LA ANEMIA FALCIFORME

La subunidad β de la hemoglobina humana tiene modificaciones postraduccionales (PTM) en las posiciones 2, 9, 10, 13, 18, 45, 51, 60, 67, 83, 88, 94, 121 y 145. 
La valina de aminoácidos involucrada en la patologia de la enfermedad en la posición 2 puede ser Ácido N-acetilado, glicosilado y pirúvico iminilado. 
La subunidad β está glicosilada en las posiciones 9, 18, 67, 121 y 145 y tiene varios sitios fosforilados, como los residuos de serina en las posiciones 10 y 45 y los residuos de treonina en las posiciones 13, 51 y 88. Los residuos de lisina en las posiciones 60, 83 y 145 están N6-acetiladas. Finalmente, el residuo de cisteína en la posición 94 está S-nitrosilado.  
Todos los PTM se encuentran dentro de las regiones desordenadas o flexibles en esta subunidad, que se caracteriza por el siguiente perfil de trastorno / flexibilidad : 1–9 ( 10–13 ) - ( 44–55 ) 56–66 (67-104 ) - ( 120-141 ) 142-147.
Estas observaciones sugieren que, aunque la mutación que produce células falciformes en la subunidad β de Hb sí afecta la predisposición de esta proteína a varias PTM y no solo en el sitio de mutaciónper se , lo que sugiere el posible efecto de esta mutación en la regulación basada en PTM de la funcionalidad de la subunidad β. En otras palabras, dado que la cadena β de Hb es la subunidad directamente implicada en la anemia de células falciformes, el trastorno intrínseco dentro de la región N-terminal de esta proteína podría desempeñar un papel en la enfermedad de células falciformes.

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Referencia Bibliográfica